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荧光分光光度计的结构有哪些特点
荧光分光光度计和紫外分光光度计属于一类产品,其结构由激发光源、单色器、样品室、光电倍增管和读出(记录)装置组成。但它们的光源不同。荧光分光光度计多采用高压汞灯、氙灯和激光光源。同时,荧光测量大多采用激发光和发射光成直角的光路,仪器元件的排列方式不同。
(1)激发光源:光源强度高于吸收法。
汞灯:发射强度高且稳定,不需要复杂的电源,但谱线不连续,数量少。它主要用于过滤荧光计。
碘钨灯:提供连续光谱300~700mn。
氙灯:发射光线强度高,谱线连续,分布在200~700 nm光域,在300~400 nm波段光线强度几乎相等,但灯的电源需要大电源,而且电源稳定,所以电源结构复杂。
激光:发光强度高,可大大提高荧光分析的灵敏度。
(2) 样品池:通常由石英池(用于液体样品)或固体样品架(用于粉末或片状样品)组成。测量液体时,光源与检测器成直角布置;测量固体时,光源与检测器呈锐角排列。在低温荧光测量中,将装有液氮的透明石英真空瓶覆盖在样品池中。
(3) 单色仪:荧光光谱仪通常有两个滤光片:滤光片位于光源和样品池之间,滤除不需要的光,让需要的激发光通过。第二个滤光片位于样品池和检测器之间,滤除来自溶剂的散射光、来自容器表面的散射光、杂质发出的光等,让物质发出的荧光被测试通过。
荧光分光光度计通常有两个光栅,与滤光片位置相同,单色性好。
(4)检测器:由于荧光通常较弱,采用光电倍增管作为检测器,灵敏度高。选择光电倍增管时,请考虑:响应波长、灵敏度和声音电平。蓝色敏感管适用于蛋白质和核酸的测量,而红色敏感管适用于荧光染料的检测。
(5)显示系统:灯光秤、计算机操作系统等