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液相色谱仪常用检查器的品种 |
检查器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的改变转化为可供检查的信号,常用检查器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。 1.紫外可见吸收检查器(ultraviolet-visible detector,UVD) 紫外可见吸收检查器(UVD)是HPLC中运用zui广泛的检查器之一,简直一切的液相色谱仪都配有这种检查器。其特点是灵敏度较高,线性规模宽,噪声低,适用于梯度洗脱,对强吸收物质检查限可达1ng,检查后不损坏样品,可用于制备,并能与任何检查器串联运用。紫外可见检查器的作业原理与构造同通常分光光度计类似,实际上即是装有活动地的紫外可见光度计。 (1)紫外吸收检查器 紫外吸收检查器常用氘灯作光源,氘灯则发射出紫外-可见区规模的接连波长,并装置一个光栅型单色器,其波长挑选规模宽(190nm~800nm)。它有两个流转池,一个作参比,一个作丈量用,光源宣布的紫外光照射到流转池上,若两流转池都经过纯的均匀溶剂,则它们在紫外波长下简直无吸收,光电管上接受到的辐射强度持平,无信号输出。当组分进入丈量池时,吸收必定的紫外光,使两光电管接受到的辐射强度不等,这时有信号输出,输出信号巨细与组分浓度有关。 约束:活动相的挑选受到必定约束,即具有必定紫外吸收的溶剂不能做活动相,每种溶剂都有截止波长,当小于该截止波长的紫外光经过溶剂时,溶剂的透光率降至10%以下,因此,紫外吸收检查器的作业波长不能小于溶剂的截止波长。 (2)光电二极管阵列检查器(photodiode array detector, PDAD) 也称疾速扫描紫外可见分光检查器,是一种新式的光吸收式检查器。它选用光电二极管阵列作为检查元件,构成多通道并行作业,一起检查由光栅分光,再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号,然后对二极管阵列疾速扫描收集数据,得到吸收值(A)是保存时刻(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。由此可及时调查与每一组分的色谱图相应的光谱数据,然后敏捷决议具有*挑选性和灵敏度的波长。 单光束二极管阵列检查器,光源宣布的光先经过检查池,透射光由全息光栅色散成多色光,射到阵列元件上,使一切波长的光在接收器上一起被检查。阵列式接收器上的光信号用电子学的办法疾速扫描获取出来,每幅图象仅需求10ms,远远超过色谱流出峰的速度,因此可随峰扫描。 2.荧光检查器(fluorescence detector, FD) 荧光检查器是一种高灵敏度、有挑选性的检查器,可检查能发生荧光的化合物。某些不发荧光的物质可经过化学衍生化生成荧光衍生物,再进行荧光检查。其zui小检查浓度可达0.1ng/ml,适用于痕量剖析;通常情况下荧光检查器的灵敏度比紫外检查器约高2个数量级,但其线性规模不如紫外检查器宽。 这些年,选用激光作为荧光检查器的光源而发生的激光诱导荧光检查器极大地增强了荧光检查的信噪比,因此具有很高的灵敏度,在痕量和超痕量剖析中得到广泛运用。 3. 示差折光检查器(differential refractive Index detector, RID) 示差折光检查器是一种浓度型通用检查器,对一切溶质都有响应,某些不能用挑选性检查器检查的组分,如高分子化合物、糖类、脂肪烷烃等,可用示差检查器检查。示差检查器是根据接连测定样品流路和参比流路之间折射率的改变来测定样品含量的。光从一种介质进入另一种介质时,因为两种物质的折射率不一样就会发生折射。只需样品组分与活动相的折光指数不一样,就可被检查,二者相差愈大,灵敏度愈高,在必定浓度规模内检查器的输出与溶质浓度成正比。 4. 电化学检查器(elec)chemical detector, ED) 电化学检查器主要有安培、极谱、库仑、电位、电导等检查器,属挑选性检查器,可检查具有电活性的化合物。目前它已在各种无机和有机阴阳离子、生物安排和体液的代谢物、食物添加剂、环境污染物、生化制品、农药及医药等的测定中获得了广泛的运用。其间,电导检查器在离子色谱中运用zui多。 电化学检查器的长处是: ①灵敏度高,zui小检查量~般为ng级,有目可达pg级; ②挑选性好,可测定很多非电活性物质中极痕量的电活性物质; ③线性规模宽,通常为4~5个数量级; ④设备简略,本钱较低; ⑤易于主动操作。 5. 化学发光检查器(c。iluminescence detector, CD) 化学发光检查器是这些年发展起来的一种疾速、灵敏的新式检查器,因其设备简略、价廉、线性规模宽等长处。其原理是根据某些物质在常温下进行化学反应,生成处于激起态势反应中间体或反应产品,当它们从激起态回来基态时,就发射出光子。因为物质激起态的能量是来自化学反应,故叫作化学发光。当别离组分从色谱柱中洗脱出来后,立即与恰当的化学发光试剂混合,引起化学反应,致使发光物质发生辐射,其光强度与该物质的浓度成正比。 这种检查器不需求光源,也不需求杂乱的光学系统,只需有恒流泵,将化学发光试剂以必定的流速泵入混合器中,使之与柱流出物敏捷而又均匀地混合发生化学发光,经过光电倍增管将光信号成为电信号,就可进行检查。这种检查器的zui小检出量可达10-12g。 |